Articles

Hibridarea genomică comparativă

Hibridarea genomică comparativă (cunoscută și sub numele de CGH) este un tip de tehnică de hibridare in situ cu fluorescență {FISH} care compară și măsoară diferențele de modificări ale numărului de copii între 2 probe de ADN, proba de test și proba de control, și oferă, de asemenea, o hartă a regiunilor cromozomiale care au fost câștigate sau pierdute

Avantajele CGH

Hibridarea genomică comparativă a permis:

  • Vizualizarea delețiilor și duplicațiilor în segmente foarte mici de ADN (ceea ce este de mare importanță, deoarece acestea pot apărea în sindroame de malformații congenitale și în cancer)
  • Cercetări ale întregului genom fără cunoștințe prealabile cu privire la aberația cromozomială în cauză
  • Analiză fără a fi nevoie de sonde specifice
  • Dezvăluirea prezenței genelor amplificate în cancer și cartografierea localizării acestora
  • Nu ca FISH, CGH este capabilă să;

1. Să identifice cromozomul cu aberația2. Să identifice locația specifică din care provine materialul suplimentar

FISH este capabilă doar să identifice cromozomul cu aberația respectivă

Dezavantaje ale CGH

S-au constatat unele probleme privind utilizarea CGH în ceea ce privește :

  • Inexactități în anumite regiuni ale cromozomilor (în regiunile cu cantități mari de secvențe repetate, regiunile centromerice ale cromozomilor acrocentrici și în telomerii majorității cromozomilor
  • Modificările numărului de copii pot fi reperate doar dacă mai mult de 50% din celulele analizate conțin un câștig sau o pierdere cromozomială

.

  • Nu a fost capabil să identifice anomalii cromozomiale care sunt echilibrate
  • Sensibilitate scăzută din cauza contaminării celulelor testate cu celule normale

Tehnica CGH

1. Pregătirea lamelelor de metafază: cromozomii în metafază sunt folosiți ca ADN țintă. Se folosește apoi colchicina pentru a opri celulele în mitoză, iar celulele sunt apoi aruncate pe lamă în așa fel încât să fie răspândite frumos și să nu se suprapună

2. Extracția ADN-ului de test și de referință: ADN-ul de test se extrage din țesut în vrac proaspăt/congelat sau din țesut încorporat în parafină 3. Marcarea și fragmentarea ADN-ului de test și de referință: Se realizează printr-un proces numit Nick Translation în care ADN-ul de test și de referință sunt marcate direct cu ajutorul unor fluorocromi diferiți – ADN-ul de test produce o fluorescență verde – ADN-ul de referință produce o fluorescență roșie

4. Hibridizarea: Cantități egale de ADN marcat cu ADN de test și ADN de referință concurează pentru a suferi o împerechere de baze complementare cu secvențe specifice pe suprafețe de metafază

5. Utilizarea microscopiei de fluorescență & Analiza digitală a imaginilor: Raportul de fluorescență al intensității roșu – verde este calculat pentru a determina dacă a avut loc o pierdere sau un câștig cromozomial

Aplicații ale CGH

CGH este utilizat în prezent în cercetarea cancerului (deoarece modificările numărului de copii au o importanță patogenică). în cancer) și în genetica clinică (pentru a îmbunătăți diagnosticul citogenetic în diagnosticarea rearanjamentelor cromozomiale dezechilibrate)

Legături

Bibliografie

Lecturi suplimentare

(Articole)

  • Comparative Genomic Hybridisation, Contribuție: Jane Bayani și Jeremy A. Squire,Princess Margaret Hospital and The Ontario Cancer Institute, University of Toronto,Toronto, Ontario, Canada
  • Genome screening by comparative genomic hybridization, Farahnaz Forozan, Ritva Karhu,JuhaIA Kononen, Anne Kallioniemi, Olli-P Kallioniemi
  • Analiză citogenetică din ADN prin hibridizare genomică comparativă, Gerard Tachdjian, Azzedine Aboura, Jean Michel Lapierre, Franck Viguie

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.